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Análisis del antígeno prostático específico (PSA)

Figura Figura 12 A-D. Valor específico del antígeno prostático alton figura 12B representa células PC-3 incubadas con 4E La figura 12D valor específico del antígeno prostático alton células PC-3 incubadas con 3D Los diferentes patrones en el desplazamiento hacia la derecha en las figuras 12A y 12C sugieren que los dos anticuerpos pueden reconocer epítopos diferentes de PSMA.

Se añadió PSMA purificado por inmunoafinidad diluido en serie a placas de 96 pocillos recubiertas con 7EC5 y se detectaron mediante incubación con sobrenadantes de 3D Se midió la absorbancia a mm en un lector de microplacas. Se añadió PSMA purificado por inmunoafinidad diluido en serie a placas de 96 pocillos recubiertas con 3D Se midió la absorbancia a nm en un lector de microplacas.

Examen de sangre para antígeno prostático específico (PSA)

Obsérvese también en el carril 2 la reactividad de anticuerpo monoclonal 4E Los anticuerpos se enumeran bajo la región de la proteína correspondiente a la ubicación aproximada de sus epítopos de unión. La parte inferior de la figura enumera 3 anticuerpos que se encontró que se unían sólo a conformaciones nativas valor específico del antígeno prostático alton la proteína y no a proteína desnaturalizada o fragmentos de proteína.

La presente invención se refiere a anticuerpos monoclonales específicos para epítopos conformacionales sobre el dominio extracelular de PSMA, a métodos para usar tales anticuerpos y a una variante de proteína truncada, PSM', identificada por tales anticuerpos.

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En una realización específica a modo de ejemplo en la sección 6, a continuación, se usó un péptido sintético derivado de la región C-terminal de PSMA como inmunógeno. Los resultados muestran que un anticuerpo denominado 3F5.

Adicionalmente, ejemplos de funcionamiento en las secciones 7 y 8, valor específico del antígeno prostático alton continuación, demuestran la producción de anticuerpos monoclonales adicionales dirigidos frente al dominio extracelular de PSMA tras la inmunización de animales con una preparación de membrana tumoral que expresa PSMA.

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Una vez tratados previamente o hiperinmunizados, pueden usarse los animales como una fuente de linfocitos productores de anticuerpo. Los linfocitos de ratón proporcionan un porcentaje mayor de fusiones estables con las líneas de mieloma de ratón descritas a continuación.

Los linfocitos perdiendo peso derivarse de pacientes con carcinomas de próstata diagnosticados.

Liss, Inc. Preferiblemente, las líneas celulares de mieloma adecuadas para su uso en procedimientos de fusión de producción de hibridomas no producen anticuerpos, tienen alta eficacia de fusión, y carencias valor específico del antígeno prostático alton enzimas que las hacen incapaces de crecer en ciertos medios selectivos que soportan el crecimiento de los hibridomas deseados. RCY3, Y3-Ag 1.

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Se han descrito métodos de fusión por Kohler y MilsteinNature ;Eur. Los agentes de estimulación de la fusión usados por los investigadores fueron virus de Sendai y polietilenglicol PEGrespectivamente. Debido a la baja frecuencia de obtención de híbridos viables, es esencial tener un medio para seleccionar los valor específico del antígeno prostático alton de células fusionadas del resto de las células no fusionadas, particularmente las células de mieloma no fusionadas.

También es necesario un medio para detectar los hibridomas que producen anticuerpos entre los otros híbridos de células fusionadas resultantes. Generalmente, se cultivan las células fusionadas en medios selectivos, por ejemplo medio HAT que contiene hipoxantina, aminopterina y timidina.

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El medio HAT permite la proliferación de células híbridas y evita el crecimiento de células de mieloma no fusionadas que normalmente seguirían dividiéndose indefinidamente.

La aminopterina bloquea la síntesis de novo de pirimidina y purina inhibiendo la producción de tetrahidrofolato.

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La adición de timidina supera el bloqueo en la síntesis de pirimidina, mientras que se incluye hipoxantina en el medio para que las células inhibidas sinteticen purina usando la ruta de recuperación de nucleótidos.

Las células de mieloma empleadas son mutantes que carecen de hipoxantina-fosforibosilo transferasa HPRT y por tanto no pueden utilizar la ruta de valor específico del antígeno prostático alton.

En el híbrido superviviente, el linfocito B suministra información genética para la producción de esta enzima.

INTRODUCCIÓN: Cuando el antígeno prostático específico (PSA) sérico se encuentra entre 4,1 y 10 ng/ml un número importante de pacientes.

Valor específico del antígeno prostático alton de dos a tres semanas, cuando clones de híbridos se han vuelto visibles por microscopio, se somete a ensayo el fluido sobrenadante de los pocillos individuales que contienen clones de híbridos para detectar anticuerpos específicos. Una vez seleccionados y clonados los híbridos de células fusionadas deseados en líneas celulares productoras de anticuerpos individuales, cada línea celular puede propagarse de cualquiera de dos maneras habituales.

El animal inyectado desarrolla tumores que secretan el anticuerpo monoclonal específico producido por el híbrido de células fusionadas.

INTRODUCCIÓN: Cuando el antígeno prostático específico (PSA) sérico se encuentra entre 4,1 y 10 ng/ml un número importante de pacientes.

Pueden extraerse líquidos corporales del animal, tales como suero o líquido ascítico, para proporcionar anticuerpos monoclonales en alta concentración. USA ; Newuberger et al. Usando técnicas descritas de manera general en la sección 5.

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Los anticuerpos 3D Los anticuerpos del isotipo IgG activan la citolisis mediada por el complemento y se unen a células fagocíticas mediante su región Fc. Durante el desarrollo de una respuesta frente a anticuerpos, las células productoras de anticuerpos segregan en primer lugar el isotipo IgM que eventualmente cambia a IgG.

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Tales acontecimientos de cambio de clase se producen mediante transposición de ADN de genes de región constante de manera que se conserva la misma especificidad de antígeno. Los diferentes isotipos de anticuerpos tienen diferentes funciones efectoras. En cambio, IgE se une a mastocitos en una reacción alérgica para desencadenar la liberación de histamina.

Las líneas celulares de hibridoma también producen variantes de cambio de clase durante el cultivo a largo plazo. Puede seleccionarse cualquier variante de cambio de clase para una función efectora deseable particular Spira et al. La presente invención abarca variantes de IgG de los anticuerpos monoclonales de la invención, incluyendo 3F5.

Análisis del antígeno prostático específico (PSA) - Instituto Nacional del Cáncer

Las seccionesa continuación, muestran que los anticuerpos mostrados a modo de ejemplo reconocen una proteína de kDa de peso molecular.

En particular, la mayoría de estos anticuerpos reconocen también una proteína de kDa de peso molecular en lisados celulares de tumor de próstata.

Mientras que la proteína de kDa también se reconoce por anticuerpo 7EC5, la valor específico del antígeno prostático alton de peso molecular inferior sólo se detecta por los anticuerpos de la invención.

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Sin embargo, antes de la presente invención, nunca se notificó una proteína de PSM', y se pensaba que valor específico del antígeno prostático alton un ARNm no traducido. En otra realización valor específico del antígeno prostático alton la invención, las líneas celulares de hibridoma mostradas a modo de ejemplo pueden usarse para producir composiciones que comprenden un sitio de unión a antígeno o variantes de anticuerpos que combinan las Adelgazar 50 kilos hipervariable o variable murina con la región constante humana o regiones de entramado constante y variable, es decir, anticuerpos quiméricos o humanizados así como anticuerpos humanizados que conservan sólo las CDR de unión a antígeno del anticuerpo original en asociación con regiones de entramado humanas véase, Waldmann,Science, particularmente y referencias citadas en el mismo.

Para ilustración, y de ninguna manera a modo de limitación, puede prepararse una biblioteca de inmunoexpresión y examinarse para seleccionar fragmentos de unión a anticuerpo para PSMA y PSM' tal como sigue véase, Huse et al.

Natl Acad. USA Puede purificarse ARN total por ejemplo, usando kits disponibles comercialmente y valor específico del antígeno prostático alton en ADNc usando un cebador de oligo dT para la cadena ligera L y un cebador específico para la cadena pesada H usando transcriptasa inversa. Puede realizarse la amplificación mediante reacción en cadena de la polimerasa PCR de las secuencias de cadena H y L de inmunoglobulina por separado con conjuntos de pares de cebadores.

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Tales cebadores conservarían preferiblemente la cadena L de longitud completa y proporcionarían cadenas H correspondientes a la Fd de IgG y conservando los enlaces disulfuro H-L. Tales vectores contienen una secuencia líder pelB, un sitio de unión a ribosoma y codones de detención.

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El ADN de fago recombinante ligado se incorpora en bacteriófagos con extracto de envasado in vitro y se usan para infectar E. Se explora la biblioteca de inmunoexpresión así creada para seleccionar fragmentos de unión a antígeno usando PSMA, PSM' o un péptido específico de los mismos.

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Pueden seleccionarse clones positivos e identificarse tal como se describe por Mullinax et al. Los anticuerpos monoclonales de la presente invención pueden usarse para detectar células de carcinoma de próstata en muestras histológicas y citológicas y, en particular, para distinguir tumores malignos de tejidos normales y tumores no malignos.

Las muestras de tejido pueden valor específico del antígeno prostático alton mediante los anticuerpos y detectarse su unión mediante un segundo anticuerpo conjugado con un marcador tal como peroxidasa, fluoresceína, fosfatasa alcalina y similares.

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Esta inmunoglobulina anti-ratón se marca con un compuesto, por ejemplo rodamina o isotiocianato de fluoresceína, que fluoresce a una longitud de onda particular. El uso de los anticuerpos monoclonales de la invención puede extenderse para examinar líquidos biológicos humanos para determinar la presencia de determinantes antigénicos específicos reconocidos.

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La detección de tumores que no ponen la vida en peligro se llama "sobrediagnóstico" y el tratamiento de estos tumores se llama "exceso de tratamiento". Los efectos secundarios de esos tratamientos son la incontinencia urinaria inhabilidad de controlar el flujo de orinaproblemas con las funciones intestinales, la disfunción eréctil falta de erecciones, o tener erecciones que son inadecuadas para las relaciones sexuales e infección. valor específico del antígeno prostático alton

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En específico, hablé sobre una cadena de pizzerías en Minneapolis, Punch Pizza, cuyo dueño, John Soranno, tomó la decisión comercial de aumentar el salario de sus empleados a diez dólares la hora. Hace un par de semanas, recibí una carta del dueño de una pequeña empresa que vio el discurso esa noche.

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Tiene razón. Por eso hace dos meses, emití una orden presidencial valor específico del antígeno prostático alton exigía que los empleados con nuevos contratos federales recibieran un salario justo de al menos diez dólares y diez centavos por hora.

Pero si queremos marcar una diferencia para todas las personas que viven en Estados Unidos, el Congreso tiene que hacer algo. Y el país lo sabe. Ahora mismo, hay un proyecto de ley que subiría el salario mínimo en Estados Unidos a diez dólares y diez centavos por hora.

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Eso sería un aumento de salario para casi 28 millones de personas que viven en Estados Unidos. Y no hablamos sólo de jóvenes que entran en el mundo laboral por primera vez. La media de los trabajadores con salario mínimo es de 35 años.

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Trabajan duro, a menudo en trabajos que exigen mucho físicamente. Y aunque no siempre estemos de acuerdo en política, una cosa en la que estamos totalmente de acuerdo es que ninguna.

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Ambas se responsabilizan por la inacción que las partes explotan políticamente sin que se vislumbre una salida legislativa que beneficie a millones de indocumentados y a sus familiares ciudadanos y residentes. Recordemos que ha sido la pésima aplicación de la discreción procesal del llamado Memorando de Morton, de presuntamente centrarse en deportar delincuentes, uno de los motores de la maquinaria de deportaciones. Se habla, valor específico del antígeno prostático alton ejemplo, de un nuevo memorando que, entre otras cosas, limitaría las prioridades de deportación tomando en cuenta los lazos familiares de un detenido o su tiempo de residir en Estados Unidos, así como permitir audiencias de fianza para esos detenidos.

No se habla de amparos a grupos de indocumentados. La administración enfatiza esto como valor específico del antígeno prostático alton el movimiento pro reforma no supiera que lo requerido es una ley que componga el sistema migratorio y cuyo componente central sea legalizar a millones sin historial delictivo y con lazos familiares. El tira y afloja sobre las cifras de deportados y los tecnicismos empleados para arribar a las mismas Adelgazar 40 kilos plasmado el intento de disfrazar lo que la teoría mal aplicada ha provocado sobre el terreno.

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Por eso, tres de cada cuatro personas que viven en Estados Unidos apoyan el aumento del salario mínimo.

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El problema es que los republicanos en el Congreso no apoyan el aumento del salario mínimo. Algunos incluso quieren eliminarlo por completo.

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En Oklahoma, por ejemplo, el gobernador republicano acaba de firmar una ley que prohíbe que las ciudades fijen sus propios salarios mínimos. Por eso, es tan importante esta lucha. Por eso, las personas como John y Yasmin van a aumentarles el salario a sus trabajadores.

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Por eso, yo voy a continuar con esta lucha. Porque sabemos que nuestra economía funciona mejor cuando funciona para todos nosotros y no sólo para unos pocos afortunados. En eso consiste la oportunidad.

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Deberían votar aunque sea sólo una vez por aumentar el salario mínimo para millones de familias trabajadoras. Si un republicano El Periódico U.

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Paula Freed. Si luce como un pato, grazna como un pato y camina como un pato, es un pato. Una deportación de una persona sin historial delictivo es una deportación, es una deportación, es una deportación. Se realizó un tacto rectal antes de practicar la ecografía transrectal valor específico del antígeno prostático alton los hallazgos como sugestivos de malignidad o no.

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La ecografía transrectal la realizamos con un ecógrafo Siemens Sonoline SI con sonda endorrectal poliplanar a 7. Se realizó profilaxis antibiótica con ciprofloxacino y preparación rectal con un enema cassen de cc 1 hora antes del procedimiento. Biopsias extraordinarias fueron realizadas cuando se detectaron zonas sospechosas con la ecografía.

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El volumen medio de las próstatas de la muestra fue de 46 cc y el volumen medio de la zona transicional fue de 22 cc. En la Tabla I se muestran las diferencias entre las medias en el grupo de pacientes con carcinoma y HBP.

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Brawer y cols. disminución de la fuerza de erección. Anticuerpos monoclonales específicos para el dominio extracelular del antígeno de membrana específico de la próstata.

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Adicionalmente, se refiere a treinta y cuatro anticuerpos monoclonales generados frente a una preparación de membrana de carcinoma de valor específico del antígeno prostático alton, anticuerpos que también reaccionan con PSMA expresado sobre la superficie celular.

PSMA es una proteína de kDa de peso molecular expresada en tejidos de la próstata y se identificó originalmente mediante reactividad con un anticuerpo monoclonal denominado 7EC5 Horoszewicz et al.

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Antes de la presente invención, no se sabía si PSM' codificaba para un producto de proteína o existía sólo como una especie de ARNm sin traducir dado que nunca se había detectado un producto de proteína de PSM'. Un informe reciente de Carter et al.

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El PSMA se describe como una proteína de membrana tipo II y se sabe que el dominio catalítico funcional de las proteínas de membrana tipo II reside en la región extracelular C-terminal de la molécula DeVries, et al. Esta diferencia observada es coherente con los niveles de proteína sérica de PSMA descritos anteriormente Horoszewicz et al.

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La invención se basa, en parte, en el descubrimiento del solicitante de anticuerpos monoclonales que reconocen el dominio extracelular de PSMA. Figura 1. Sin embargo, antes de la presente invención, nunca se había identificado PSM' en su forma de proteína. Figura 2.

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Demostración de anticuerpo monoclonal 3F5. Figura 3.

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Figura 4. Tanto 7EC5 como 3F5. El anticuerpo 3F5. Valor específico del antígeno prostático alton 5. Demostración de que los anticuerpos monoclonales 7EC5 y 3F5. Se inmunoprecipitó inicialmente lisado de LNCaP con anticuerpo monoclonal 7EC5 y se separó el material inmunoprecipitado sobre geles de SDS y se analizó con sondas en un ensayo de inmunotransferencia tipo de Western o bien con anticuerpo monoclonal 7EC5 carriles o bien con anticuerpo monoclonal 3F5.

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Los carriles 1 y 5 eran lisado de LNCaP en bruto; los carriles 2 y 6 eran lisado de LNCaP previamente aclarado; los carriles 3 y 7 eran material que inmunoprecipitaba con anticuerpo monoclonal 7EC5; y los carriles 4 y 8 eran proteínas que quedaban en el lisado de LNCaP previamente inmunoprecipitado. El anticuerpo 7EC5 inmunoprecipitó una proteína de kDa Carril 3que también se reconoció por 3F5. Sin embargo, tras la inmunoprecipitación con 7EC5, se reconoció una segunda proteína por 3F5.

Figura 6. El desplazamiento hacia la derecha indica la valor específico del antígeno prostático alton del anticuerpo a las células LNCaP vivas.

INTRODUCCIÓN: Cuando el antígeno prostático específico (PSA) sérico se encuentra entre 4,1 y 10 ng/ml un número importante de pacientes.

Figura 8. Demostración de la reactividad de anticuerpo monoclonal 3F5. Se separaron proteínas sobre geles de SDS-poliacrilamida y se transfirieron a papel de Immobilon P y se analizaron con sondas de anticuerpo monoclonal 3F5.

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La proteína purificada a partir de semen y representada en el carril 2 tiene un peso molecular de 90 kDa, que es posible que sea un producto no glucosilado o parcialmente glucosilado de PSM' que tiene un peso molecular de kDa.

Figura 9.

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Valor específico del antígeno prostático alton de la reactividad de anticuerpos monoclonales 3D Figura Figura 12 A-D. La figura 12B representa células PC-3 incubadas con 4E La figura 12D representa células PC-3 incubadas con 3D Los diferentes patrones en el desplazamiento hacia la derecha en las figuras 12A y 12C sugieren que Adelgazar 50 kilos dos anticuerpos pueden reconocer epítopos diferentes de PSMA.

Se añadió PSMA purificado por inmunoafinidad diluido en serie a placas de 96 pocillos recubiertas con 7EC5 y se detectaron mediante incubación con sobrenadantes de 3D Se midió la absorbancia a mm en un lector de microplacas.

Se añadió PSMA purificado por inmunoafinidad diluido en serie a placas de 96 pocillos recubiertas con 3D Se midió la absorbancia a nm en un lector de microplacas. Obsérvese también en el carril 2 la reactividad de anticuerpo monoclonal 4E Los anticuerpos se valor específico del antígeno prostático alton bajo la región de la proteína correspondiente a la ubicación aproximada de sus epítopos de unión.

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La parte inferior de la figura enumera 3 anticuerpos que se encontró que se unían sólo a conformaciones nativas de la proteína y no a proteína desnaturalizada o fragmentos de proteína. La presente invención se refiere a anticuerpos monoclonales específicos para epítopos conformacionales sobre el dominio extracelular de PSMA, a métodos para usar tales anticuerpos y a una variante de proteína truncada, PSM', identificada valor específico del antígeno prostático alton tales anticuerpos.

En una realización específica a modo de ejemplo en la sección 6, a continuación, se usó un péptido sintético derivado de la región C-terminal de PSMA como inmunógeno. Los resultados muestran que un anticuerpo denominado 3F5.

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Adicionalmente, ejemplos de funcionamiento en las secciones 7 y 8, a continuación, demuestran la producción de anticuerpos monoclonales adicionales dirigidos frente al dominio extracelular de PSMA tras la inmunización de animales con una preparación de membrana tumoral que expresa PSMA. Una vez tratados previamente o hiperinmunizados, pueden usarse los animales como una fuente valor específico del antígeno prostático alton linfocitos productores de anticuerpo.

Los linfocitos de ratón proporcionan un porcentaje mayor de fusiones estables con las líneas de mieloma de ratón descritas a continuación. Los linfocitos pueden derivarse de pacientes con carcinomas de próstata diagnosticados. Liss, Inc.

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Preferiblemente, las líneas celulares de mieloma valor específico del antígeno prostático alton para su uso en procedimientos de fusión de producción de hibridomas no producen anticuerpos, tienen alta eficacia de fusión, y carencias de enzimas que las hacen incapaces de crecer en ciertos medios selectivos que soportan el crecimiento de los hibridomas deseados.

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Los agentes de estimulación de la fusión usados por los investigadores fueron virus de Sendai y polietilenglicol PEGrespectivamente. Debido a la baja frecuencia de obtención de híbridos viables, es esencial tener un medio para seleccionar los híbridos de células fusionadas del resto de las células no fusionadas, particularmente las células de mieloma no fusionadas.

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También es necesario un medio para detectar los hibridomas que producen anticuerpos entre los otros híbridos de células fusionadas resultantes. Generalmente, se cultivan las células fusionadas en medios selectivos, por ejemplo medio HAT valor específico del antígeno prostático alton contiene hipoxantina, aminopterina y timidina.

El medio HAT permite la proliferación de células híbridas y evita el crecimiento de células de mieloma no fusionadas que normalmente seguirían dividiéndose indefinidamente. La aminopterina bloquea la síntesis de novo de pirimidina y purina inhibiendo la producción de tetrahidrofolato.

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La adición de valor específico del antígeno prostático alton supera el bloqueo en la síntesis de pirimidina, mientras que se incluye hipoxantina en el medio para que las células inhibidas sinteticen purina usando la ruta de recuperación de nucleótidos. Las células de mieloma empleadas son mutantes que carecen de hipoxantina-fosforibosilo transferasa HPRT y por tanto no pueden utilizar la ruta de recuperación.

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En el híbrido superviviente, el linfocito Valor específico del antígeno prostático alton suministra información genética para la producción de esta enzima. En de dos a tres semanas, cuando clones de híbridos se han vuelto visibles por microscopio, se somete a ensayo el fluido sobrenadante de los pocillos individuales que contienen clones de híbridos para detectar anticuerpos específicos.

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Una vez seleccionados y clonados los híbridos de células fusionadas deseados en líneas celulares productoras de anticuerpos individuales, cada línea celular puede propagarse de cualquiera de dos maneras habituales. El animal inyectado desarrolla tumores que secretan el anticuerpo monoclonal específico producido por el híbrido de células fusionadas.

Pueden extraerse líquidos corporales del animal, tales como suero o líquido ascítico, para proporcionar anticuerpos monoclonales en alta concentración. USA ; Newuberger et al. Usando técnicas descritas de manera general en la sección 5. Los anticuerpos 3D Los anticuerpos del isotipo IgG activan la valor específico del antígeno prostático alton mediada por el complemento y se unen a células fagocíticas mediante su región Fc. Durante el desarrollo de una respuesta valor específico del antígeno prostático alton a anticuerpos, las células productoras de anticuerpos segregan en primer lugar perdiendo peso isotipo IgM que eventualmente cambia a IgG.

Tales acontecimientos de cambio de clase se producen mediante transposición de ADN de genes de región constante de manera que se conserva la misma especificidad de antígeno.

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Los diferentes isotipos de anticuerpos tienen diferentes funciones efectoras. En cambio, IgE se une a mastocitos en una reacción alérgica para desencadenar la valor específico del antígeno prostático alton de histamina.

Las líneas celulares de hibridoma también producen variantes de cambio de clase durante el cultivo a largo plazo. Puede seleccionarse cualquier variante de cambio de clase para una función efectora deseable particular Spira et al. La presente invención abarca variantes de IgG de los anticuerpos monoclonales de la invención, incluyendo 3F5.

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Las seccionesa continuación, muestran que los anticuerpos mostrados a modo de ejemplo reconocen una proteína de kDa de peso molecular. En particular, la mayoría de estos anticuerpos reconocen también una proteína de kDa de peso molecular en lisados celulares de tumor de próstata.

Mientras que la proteína de kDa también se reconoce por valor específico del antígeno prostático alton 7EC5, la proteína de peso molecular inferior sólo se detecta por los anticuerpos de la invención.

Examen de sangre para antígeno prostático específico (PSA): MedlinePlus enciclopedia médica

Sin embargo, antes de la presente invención, nunca se notificó una proteína de PSM', y se pensaba que era un ARNm no traducido. En otra realización de la invención, las líneas celulares de hibridoma mostradas a modo de ejemplo pueden usarse para producir composiciones que comprenden un sitio de unión a antígeno o variantes de anticuerpos que combinan las regiones hipervariable o variable murina con la región constante humana o regiones de entramado constante y variable, es decir, anticuerpos quiméricos o humanizados así como anticuerpos humanizados que conservan sólo las CDR de unión a antígeno del anticuerpo original en asociación con regiones de entramado humanas véase, Waldmann, valor específico del antígeno prostático alton, Science, particularmente y referencias citadas en el mismo.

Para ilustración, y de ninguna manera a modo de limitación, puede prepararse una biblioteca de inmunoexpresión y examinarse para seleccionar fragmentos de unión a anticuerpo para PSMA y PSM' tal como sigue véase, Huse et al. Natl Acad.

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USA Puede purificarse ARN total por ejemplo, usando kits disponibles comercialmente y convertirse en ADNc valor específico del antígeno prostático alton un cebador de oligo dT para la cadena ligera L y un cebador específico para la cadena pesada H usando transcriptasa inversa.

Puede realizarse la amplificación mediante reacción en cadena de la polimerasa PCR de las secuencias de cadena H y L de inmunoglobulina por separado con conjuntos de pares de cebadores.

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Tales cebadores conservarían preferiblemente la cadena L de valor específico del antígeno prostático alton completa y proporcionarían cadenas H correspondientes a la Fd de IgG y conservando los enlaces disulfuro H-L. Tales vectores contienen una secuencia líder pelB, un sitio de unión a ribosoma y codones de detención. El ADN de fago recombinante ligado se incorpora en bacteriófagos con extracto de envasado in vitro y se usan para infectar E. Se explora la biblioteca de inmunoexpresión así creada para seleccionar fragmentos de unión a antígeno usando PSMA, PSM' o un péptido específico de los mismos.

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Pueden seleccionarse clones positivos e identificarse tal como se describe por Mullinax et al. Los anticuerpos monoclonales de la presente invención pueden usarse para detectar células de carcinoma de próstata en muestras histológicas y citológicas y, en particular, para distinguir tumores malignos de tejidos normales y tumores no malignos. Valor específico del antígeno prostático alton muestras de tejido pueden teñirse mediante los anticuerpos y detectarse su unión mediante un segundo anticuerpo conjugado con un marcador tal como peroxidasa, fluoresceína, fosfatasa alcalina y similares.

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Esta inmunoglobulina anti-ratón se marca con un compuesto, por ejemplo rodamina o isotiocianato de fluoresceína, que fluoresce a una longitud de onda particular. El uso valor específico del antígeno prostático alton los anticuerpos monoclonales de la invención puede extenderse para examinar líquidos biológicos humanos para determinar la presencia de determinantes antigénicos específicos reconocidos.

Los anticuerpos específicos para extremos opuestos de PSMA tales como 7EC5 y los anticuerpos de la invención son particularmente adecuados para su uso en un ensayo de este tipo. Con valor específico del antígeno prostático alton a esto, puede anclarse un anticuerpo a un sustrato para capturar PSMA o PSM' en un líquido biológico, mientras que se usa el otro anticuerpo para detectar el antígeno unido a anticuerpo.

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